產(chǎn)品說(shuō)明

匯智泰康公司的致瀉性大腸埃希氏菌多重PCR檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)腸道致病性大腸埃希氏菌 (Enteropathogenic Escherichia coli.，EPEC)，腸道侵襲性大腸埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli.，EIEC)，產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli.，ETEC)，腸道出血性大腸埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli.，EHEC)，和腸道集聚性大腸埃希氏菌(Enteroaggregative Escherichia coli.，EAEC)5種常見(jiàn)的致瀉大腸埃希氏菌。

產(chǎn)品組成 （50次，25 µL PCR）

* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP，含MgCl₂的PCR優(yōu)化反應(yīng)緩沖液。使用頻率高時(shí)一旦融解請(qǐng)于4^oC保存或分裝保存。

儲(chǔ)存條件

-20^oC長(zhǎng)期保存。多次反復(fù)凍融會(huì)降低檢測(cè)效率。

使用說(shuō)明

• DNA樣本處理、反應(yīng)體系配制、核酸擴(kuò)增和結(jié)果鑒定等各步驟應(yīng)分域進(jìn)行，以避免交叉污染。
• 細(xì)菌基因組DNA可使用市售試劑盒提取，也可按以下方法快速制備：

從平板上挑取適量菌落，加入含有200 µL ddH₂O的滅菌離心管中，渦旋震

• 菌液煮沸10 min，冷卻至室溫后，13,000 rpm離心2 min。
• 將上清移至新離心管中，即得可用于本試劑盒檢測(cè)的細(xì)菌DNA模板。

• PCR反應(yīng)液配制：

2 X Master Mix 12.5 µL

Primer Mix 2.5µL

陽(yáng)性對(duì)照/樣品DNA 2 µL

H₂O 8 µL

反應(yīng)終體積 25µL

• PCR反應(yīng)條件：

94^oC 預(yù)變性 5min

94 ^oC 變性 30 sec

30個(gè)循環(huán) 63 ^oC 復(fù)性 30 sec

72 ^oC 延伸 1.5min

72 ^oC 延伸  5 min

• PCR反應(yīng)完成后加入loading buffer，用無(wú)核酸染料瓊脂糖凝膠（2%）電泳檢測(cè)15 µL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物 (120 V，45 min)。電泳完后泡膠染色30min。5種致瀉大腸埃希氏菌的檢測(cè)結(jié)果如下圖所示。

6.  注意事項(xiàng)：

試劑使用前建議短暫離心后開(kāi)啟。

PCR反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒信渲?，以增?qiáng)檢測(cè)的特異性。